大肠埃希杆菌性胃肠炎需要做什么检查？

诊疗

在盛行时期，通常腹泻的婴幼儿，应起首思量为大肠埃希杆菌性胃肠炎，先隔绝治疗，等候病原学查抄确诊。在非盛行期，格外是分发病例，仅靠临床常难以诊疗，必需连合病原学、血清学查抄确诊。

实行室查抄

1.征求标本 以无菌棉拭子蘸取腹泻病病患粪便，如无粪便，以浸湿磷酸盐缓冲液的直肠拭子拔出肛门4～6cm(婴幼儿2～3cm)处，在直肠内旋转擦取直肠外貌黏液后取出，盛于运送或生活液中，如不克不及及时送检，样品应在4℃冷藏生活，但以不高出8h 为宜。

2.增菌和疏散作育 对付大肠埃希杆菌的疏散应在初代疏散时选用弱选择性作育基，如伊红亚甲蓝、我国蓝蔷薇酸式山梨醇麦康凯平板。划线疏散，35～37℃作育18～24h 后，观察菌落形状特性，选取紫赤色或暗赤色、大小1～3mm、边沿划一有光芒、中间突出的单个菌落举行鉴定。

3.鉴定

(1)末尾鉴定：依据菌落特性、涂片染色的菌形及染色反响，取纯作育物细菌作图1 所示生化反响，凡切合于表1 所示结果可末尾鉴定为大肠埃希杆菌。

(2)末了鉴定：一样寻常老例查验做到上述末尾鉴定即可，需要时可按《伯杰体系细菌学手册》所列生化反响做出末了鉴定，此中重要的鉴定实验为：触酶阳性，氧化酶阴性;发酵葡萄糖产酸产气或只产酸，发酵乳糖产酸产气或愚钝发酵产酸，不发酵肌醇;IMVC 反响区分为+，+，-，-(占94.6%);脲酶阴性，H2S 阴性，苯丙氨酸脱氨酶阴性，硝酸盐恢复阳性，动力少数阳性。简便的要领是采取肠杆菌科试剂盒，依据反响结果编码后做出末了鉴定。

(3)鉴定实验：某些大肠埃希杆菌，特别是无动力的不发酵乳精株，应与志贺菌相区分，二者的重要区分实验可用醋酸钠和葡萄糖铵应用实验及黏质酸盐产酸3 种实验。大肠埃希杆菌均为阳性，而志贺菌为阴性。

① 致病性大肠埃希杆菌：

A.假定实验：于区分平板上菌落生长浓重处挑取作育物，以EPEC 的3 种多价O 血清作玻片凝集实验。如与某一种多价O 血清凝集，再与该多价血清所包括的O 单价血清做实验。如与某个O 单价血清凝集，再挑取3～5 个单个菌落，与该血清作凝集实验。

B.生化实验：选择O 单价血清强凝集的菌落接种三糖铁琼脂，悬挂靛基质试纸片，经36℃作育18～20h。通常乳糖、蔗糖产酸，葡萄糖产酸并少数产气，H2S阴性，靛基质阳性的菌株，可证明为大肠埃希杆菌。要是靛基质为阴性时，还必需V-P 实验为阴性，且不克不及在西蒙枸橼酸盐琼脂上生长，方可证明为大肠埃希杆菌。

C.血清学证明实验：刮取三糖铁琼脂上的作育物，用生理盐水制成菌悬液，稀释至与MacFarland 3 号比浊管相称的浓度。0 单价血清要是原效价在1∶(160～320)，则可l∶40 稀释(用0.5%盐水)。在10mm×75mm 试管内，将稀释的抗血清与菌悬液等量殽杂，于50.6℃水温中16h 后观察结果。要是出现凝集，可证明为该O 因子。

②出血性大肠埃希杆菌：已知为出血性肠炎病患的粪便，可划线接种以山梨醇替代乳糖的麦康凯琼脂平板。经作育后，挑选3～5 个山梨醇不发酵的菌落，以O157 血清(最好同时再以H7 血清)作玻片凝集实验和单管凝集实验以确定诊疗。

疏散的菌株应接种三糖铁琼脂，悬挂靛基质试纸片，经36℃作育18～20h。模范的生化特性为乳糖、蔗糖产酸，葡萄糖产酸产气，H2S 阴性，靛基质阳性。并接种山梨醇发酵管，为愚钝发酵。

③毒性大肠埃希杆菌：

A.生化实验：于区分平板上挑取可凝菌落5 个，一样寻常挑取乳糖发酵的模范菌落，区分接种三糖铁琼脂，悬挂靛基质试纸片，经36℃作育18～20h。通常乳糖、蔗糖产酸，葡萄糖产酸并多产气，H2S 阴性，靛基质阳性的菌株，可证明为大肠埃希杆菌。要是靛基质为阴性时，还必需V-P 实验阴性，且不克不及在西蒙枸橼酸盐琼脂上生长，方可证明为大肠埃希杆菌。

B.肠毒素实验：产毒性大肠埃希杆菌重要靠肠毒素实验证明。肠毒素实验的要领甚多，海外如今以双相琼脂分散实验测定LT，以乳鼠灌胃实验测定ST，偶然亦采取家兔结扎回肠段实验以测定LT 和ST。

以后已有采取基因诊疗法测定这两种肠毒素。

a.双向琼脂分散实验：将被检菌株按5 点环形接种于Elek 作育基上，以异样操纵，共做两份，于36℃作育48h。在每株菌的菌苔上放一片多黏菌素B 纸片，于36℃经5～6h，使肠毒素渗入渗出琼脂中。在离菌苔各5mm 处的中间，挖一个直径4mm 的圆孔，并用一滴琼脂垫底。在孔内滴加LT 抗毒素30μl，并用已知产LT 和不产毒菌株作比拟。于36℃作育15～20h 观察结果。在菌斑和抗毒素孔之间出现白色沉淀带者为阳性，不然为阴性。

b.乳鼠灌胃实验：将被检菌株接种于Honda 产毒肉汤内，于36℃作育24h，3000r/min 离心30min，取上清液经薄膜滤器过滤，60℃加热30min，每毫升滤液内参与2%伊文思蓝溶液0.02ml。将此滤液用塑料小管注入1～4 天龄的乳鼠胃内0.1ml，同时接种3～4 只。禁食3～4h 后用氯仿麻醉，取出全部肠管，称量肠管(包括积液)重量及剩余的体重。肠管重量与剩余体重之比大于0.09 为阳性，0.07～0.09 为可疑。

c.家兔结扎回肠段实验：将被检菌株接种于Honda 产毒肉汤，于36℃作育24h，3000r/min 离心30min，取上清液经薄膜滤器过滤。滤液分红两份，一份不加热，供测LT 用;另一份60℃加热30min，供测ST 用。取体重2kg 家兔，禁食1 天。

麻醉后剖腹，取出回肠段，按10～15cm 为一段，分段结扎。取一段注射肉汤2ml 作为阴性比拟，另一段注射已知产毒菌肉汤作育物的滤液2ml 作为阳性比拟。其他各段区分注射待试菌株肉汤作育物的滤液2ml，将腹壁缝合。测定ST时，于注射后6～8h 剖腹查抄;测定LT 时，于注射后18h 剖腹查抄。抽取各肠段内的滤液，测定其容量，并测定肠段的长度。积液量(ml)与肠段长度(cm)之比大于1 为阳性。

d.血清学实验：肠毒素实验阳性菌株可用ETEC 有关的多价O 血清及单价血清作玻片凝集实验，以确定其O 抗原。

④侵袭性大肠埃希杆菌：

A.生化实验：于区分平板上挑取菌落3～5 个，一样寻常应多挑取与志贺菌相似的不发酵乳糖的菌落，但发酵乳糖的下风菌落亦可妥当挑取。将挑取的菌落接种半固体管，36℃作育18～24h。有动力的菌株一样寻常可以弃去，除非经血清学鉴定为0124。

留下无动力的菌株，接种三糖铁琼脂，悬挂靛基质试纸片，36℃作育18～20h。同时并作赖氨酸脱羧酶实验。EIEC 的模范生化特性为：乳糖、蔗糖不产酸或产酸，葡萄糖产酸、产气或不产气，H2S 阴性，靛基质阳性，赖氨酸脱羧酶阴性，除O124 外均无动力。赖氨酸脱羧酸实验亦可以放在血清学实验以后做。

B.血清学实验：挑取三糖铁琼脂作育物，用EIEC 的两个多价O 血清作玻片凝集实验，以确定其O 抗原的原因。

C.豚鼠角膜实验：将菌液滴入豚鼠眼内2～5 天内观察能否有红肿、堕泪、充血体征。

D.ELISA 实验：用已知EIEC 或志贺菌属的有毒菌株免疫家兔，所得之免疫血清用同型的无毒菌株吸取。用ELISA 法测定，EIEC 各型的有毒菌株及志贺菌属各型的有毒菌株均为阳性。此法系检测被检菌的侵袭性多肽，亦可采取基因探针法检测。

⑤集聚性大肠埃希杆菌：集聚性大肠埃希杆菌(EAEC)的紧张特性是在Hap-2细胞左近构成特性性的集聚性黏附。Yamamoto 发明在37℃作育时，EAEC 的此种聚集性黏附可多发在某些液体作育基的生长外貌，构成很厚的黏附聚集性菌块。在25℃或42℃则无此征象，液体作育基以L 或M-H 作育基最佳，以此可作为EAEC的末尾鉴定身手。

液体作育基中菌块构成实验：大肠埃希杆菌接种于M-H 液体作育基(Difco)，35～37℃温育18～24h，凡外貌(局部下沉管底)构成菌块者为阳性，匀称混浊无菌块者为阴性。1996 年王梅等对肠道凝集性-黏附性大肠埃希杆菌举行深刻筛查实验，将M-H 作育基上的菌块构成实验与Hep-2 细胞黏附实验举行比拟，发明两者的同等率达77%，如包括弥散型和范围型在内则达88.5%。标明菌块构成实验是牢靠的末尾筛查EAggEC 的要领。

其他协助查抄：如今尚无相关资料。